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防治禽流感复方中药的安全性实验

作者:东安鸡 时间:2018-03-10 21:08 点击数:手机版

  近年来随着对中药及其制剂的广泛应用和对其毒性研究的深入,人们发现许多认为是“无毒”的中药具有一定的毒副作用,本复方中药是用于防治禽流感的一种药物,为了对其安全性做出科学评价,为临床用药提供保证,进行了安全性实验研究。 

  1  材料与方法  

  1.1  昆明小鼠  昆明小鼠80只,雌雄各半,体重18~22 g,由哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供。在人工照明12 h、通风良好情况下饲养观察3天,随机分成8组,10只/组。给药前18 h和给药后4 h内禁食,但不禁水。 

  1.2 复方中药 自行研制的复方中药为黄褐色透明澄清液体,由贯众、板蓝根、黄芪、柴胡、连翘、黄连、金银花、黄芩及甘草9味中草药组成。 

  1.3 试验环境 室温18~25℃,相对湿度60%,室内无对流风。 

  1.4 半数致死量(LD50)的测定采用简化机率单位计算法计算LD50。采取口服和腹腔注射两种给药途径。口服剂量为1 600 mg/kg体重,每只0.5 ml,口服组组间剂量比为1∶0.8,试验共分7组,其中1组为对照组,10只/组;腹腔注射组注射剂量为1000 mg/kg体重,每只0.5 ml,组间剂量比为1∶0.75,试验共为6组,其中1组为对照组,10只/组。腹腔注射后,及时剖检死亡动物并取心、肝、脾、肾、肺及肠做病理切片,观察其病理变化。 

  1.5  最大耐受量的测定 试验共分5组,口服给药剂量分别为5 000 mg/kg体重、4 000 mg/kg体重、3 200 mg/kg体重、2 600 mg/kg体重,每只1 ml,3次/天,观察10天内昆明小鼠的最大耐受量。最后一组为空白对照组。 

  2  结果 

  2.1 急性毒性的测定 腹腔注射复方中药10 min后,昆明小鼠表现出兴奋不安,痉挛,缩成一团,呼吸困难,死亡时间在给药后0.5 h。用简化几率单位计算法(也称和尔恩法)计算LD50,试验结果见表1。 

表1  急性毒性试验 

  经计算LD50=425.6±126.4 mg/kg哑铃分子结构,促使红细胞形成“缗钱状聚集体”,从而使血液黏度升高,因此可以认为,降低血浆纤维蛋白含量以减少红细胞“缗钱状聚集体”的形成,也是电针降低血液黏度的一个方面。 

  除上述因素外,血小板的聚集性也是影响血液黏度的重要因素。血小板保持一定的聚集性,通过聚集形成血小板血栓,对于防止出血是必要的。但当体内血小板聚集性过强时,会形成大量的血小板血栓,而使血液黏度增高,流动性降低,对血液循环产生不良影响。在本试验中,电针后绵羊的血小板聚集性显著降低,说明降低血小板的聚集性,使之处于分散状态,防止或减少血小板血栓的形成,是电针降低血液黏度的又一途径。 

  2.2  对数死亡几率单位直线绘制  利用表1的结果,在Excel中绘制直线,得出剂量对数死亡几率单位的关系。剂量对数死亡几率直线:y=0.2674x+1.3041(y为对数剂量,x为死亡几率)。 

  2.3 对昆明小鼠的体重影响 

  2.3.1 口服复方中药对昆明小鼠体重的影响  口服复方中药后,连续7天观察昆明小鼠的临床变化并记录体重。昆明小鼠未出现任何临床变化。第Ⅰ组(1 600 mg/kg)7天内体重增加5.49 g;第Ⅱ组(1 280 mg/kg)7天内体重增加4.24 g;第Ⅲ组(1 024 mg/kg)7天内体重增加4.56 g;第Ⅳ组(819.2 mg/kg)7天内体重增加3.61 g;第Ⅴ组(655.36 mg/kg)7天内体重增加6.87 g;第Ⅵ组(524.2 mg/kg)7天内体重增加7.19 g。对照组7天内体重增加6.53 g。 

  2.3.2  最大耐受量的测定 

  最大耐受量倍数=每只小鼠的耐受药量/小鼠平均体重×鸡平均体重/鸡每次用量经计算,该药的最大耐受量倍数为400。给药后7天,连续观察昆明小鼠的精神状态并称量体重,了解体重的变化。昆明小鼠精神状态良好,在7天内体重增加5.49 g,而对照组昆明小鼠在7天内体重增加6.34 g。 

  2.4 昆明小鼠各脏器的病理变化 给昆明小鼠腹腔注射不同剂量的复方中药10 min后,高剂量组昆明小鼠表现出兴奋不安、抽搐等现象,并在0.5 h发生死亡。马上对其剖检,发现死亡鼠的肝脏体积稍肿大,被膜紧张,边缘钝圆,表面呈暗紫红色,切面呈暗红色,质地变软;脾、肾脏体积均增大。随着剂量的减少,昆明小鼠的死亡率随之降低,脏器病变也随之减轻。病理组织学检查表明,各脏器的病理变化与剂量呈一定的关系,高剂量组昆明小鼠的心、肝、脾、肺、肾和肠出现较严重的病理变化。具体检查结果如下。 

  肝脏,中央静脉可见有红细胞,少量肝细胞发生变性坏死,肝细胞体积增大,胞浆内有大小不等的空泡,核偏位。肠,肠黏膜固有层血管充血、白细胞浸润和水肿,黏膜上皮中杯状细胞显著增多。脾脏,呈急性脾炎变化,被膜下有多量红细胞,淋巴滤泡结构不明显,淋巴细胞发生变性坏死,淋巴细胞数量减少。中央动脉内皮增生,数量增多,向管腔内凸出。肺脏,小支气管黏膜上皮细胞发生变性坏死,管腔内有少量脱落的炎性细胞和一定量的红细胞。淋巴细胞和巨噬细胞等炎性细胞浸润,有少量的脱落的上皮细胞、炎性细胞和红细胞。肾脏,肾小管上皮细胞空泡变性,严重的发生坏死。变性细胞内有大小不等的空泡,严重的胞核溶解,消失,肾小管间有一定量的炎性细胞浸润。心脏,即纤维表面不平坦,成凸凹状,肌浆内着色不均匀,有红色着染的点状或块状物质,心肌纤维核数量减少,肌纤维断裂、崩解、溶解、消失。肌纤维间有一定量的红细胞。中、低剂量组小鼠各器官出现的病理变化较高剂量组明显减轻,与对照组相比差异不明显。 

  3  讨论  


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