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中药血清药理学的研究方法及其应用

作者:东安鸡 时间:2018-03-06 04:43 点击数:手机版

  中药血清药理学是近年来逐渐发展起来的研究中药药效较为科学的一种方法,它是由日本学者田代真一于1987年首次提出的,是为了研究中药复方而诞生的一种新的体外实验方法,它是在以前体外实验的基础上加以改进形成的,即将受试药物经口给予动物后以含药血清代替中药粗提物作为药物源加入离体反应系统中研究其药理作用。它不仅具有体外实验的优点,如条件可控性强,可在细胞、亚细胞水平进行超微、生化、受体、基因等方面的研究;揭示药物作用机理较为深入,重复性好,使用材料少等,而且有其更适合中药及其复方制剂研究的独特之处。因为中药尤其是复方制剂的化学成分极其复杂,经过体外的煎煮或其他制备过程,再经口服以后在体内发生一系列变化,有的是药物本身物质发挥作用,有的是经过肝脏代谢的产物发挥作用,有的是通过第二信使间接起作用。因此,以中药粗提物的体外实验结果来评价药物的体内效应是不客观的也是不确切的。而含药血清能更好的反映药物在体内环境中产生药理效应的真实过程,在理论上更具科学性和真实性。近年来,许多专家和学者对中药血清药理学的研究进行了较为深入的研究,并取得了可喜的成绩,积累了一定经验,为中药作用机理、中药复方化学成分、中药药动学的深入研究奠定了基础。现将其研究方法和应用研究现
状作一综述。

  1  国内中药血清药理学方法的研究现状

  1.1  在动物的选择

  一般多选用大鼠、家兔、豚鼠等动物来制备含药血清,但不同种属的动物,其血清成分不同,因此在选择动物时应尽量选用与人类生物学活性近似的物种。刘成海等提出在体外培养实验中宜采用同一种单一血清,既为细胞提供营养,又为药物提供载体,还避免了多种血清的干扰,一般家兔和大鼠应为首选。

  1.2  灌胃次数与时间间隔

  有7~10 d法(1次/d,连用7~10 d), 3次给药法(连续给药3次,笫1、 2次间隔20 h, 第2、 3次间隔4 h), 2次给药法(第1次给药后2 h, 再以相同剂量重复1次)等。  各种给药方式都是为了达到稳态血药浓度,从而便于药物作用机理的研究。不过严格地说应该按药物半衰期给药,连续5~7个半衰期达到稳态血药浓度,但由于中药及其复方成分复杂,半衰期很难测定,所以7~10 d给药为权宜之计。如果对药物血清时效关系进行研究,则应另当别论。

  1.3  给药剂量

  在实验中,由于含药血清加入体外反应系统后,浓度将被稀释,从而达不到在体条件下的药物浓度,反应系统可能出现假阴性反应,针对此种情况,李氏等提出按新药药理研究的技术要求设计剂量给药,将含药血清制成冷冻干燥粉(冻干粉),以冻干粉形式加入反应系统,使之达到所需要的浓度。刘平认为给药剂量应以整体模型动物的有效剂量(即为临床成人剂量的8~18倍量)为妥。

  1.4  含药血清的采集

  大鼠一般给药1~2 h后血药浓度达峰值,此时血清为最佳含药血清,超过一天的时间,大部分药物成分已经被代谢和排泄,药物的直接作用消失,此时的血清为机体功能状态血清。当然还要考虑例外,因此最好是通过预实验来确定最佳采血时间。

  1.5  含药血清灭活与否
 
  许多学者观点不一。有的将含药血清经56 ℃ 30 min灭活,但也有的不经灭活,直接进行体外实验。刘成海等发现正常大鼠血清无论灭活与否均可维持大鼠肝贮脂细胞的贴壁生长,两组大鼠血清对肝贮脂细胞内3H-TdR掺入的影响无明显差异,刘氏主张血清经56 ℃ 30 min灭活,可排除非药理性干扰。但徐海波等认为药物血清不宜灭活,因血清经灭活以后,血清中含有的机体在药物作用下产生的内源性有效成分将减少或丧失,生物活性降低,会影响药理实验结果,而且与体内实验和临床用药情况也不相符。对于血清非药理性干扰可采取空白对照来衡定和排除,而细胞培养中的微生物感染,也可用微孔滤膜除菌法来防止。

  2  国内中药血清药理学的应用

  2.1  对单核细胞产生内生致热原的研究

  杨奎等应用中药血清药理学方法对含黄芩、含香薷、含羌活胜湿汤、含九味羌活丸等的血清分别对家兔单核细胞内生致热原产生过程中单核细胞内DNA、蛋白质合成速率及Ca2+内流的影响的机制进行了初步探讨。实验结果表明,中药血清药理学方法在进行中药时效关系研究方面,有着较大的优势。

  2.2  对肝贮脂细胞增殖及胶原合成影响的研究


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